Регистрация

Рубрикатор

Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы

26 августа 2013г.

Маликова С.А.

Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований активности ферментов в сыворотке крови.

Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p -Npp, по конечной точке.

Использовались наборы :

1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).

2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).

3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).

Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.

На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами (1).

Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного учета проведении данного теста следующих факторов:

1. Стандартизация биологического материала - определение активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние антикоагулянтов отражено на диаграмме.

1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта: 2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.


Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.

2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 % (3).

3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной реакции, используя реагенты различных фирм.

Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива. Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s” стабильны в течении всего срока годности.

Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для работы на 1-2 дня.

4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно завышены.

Билирубинммольл

Е опыта,         ед.

Е контроля, ед.

А~f( ΔЕ)

А~f(опыта)

Завышение,  %

    17,8

0,511

0,022

2332

2442

4,7

   136,0

0,504

0,084

1972

2407

22,1

   151,6

0,602

0,100

2397

2896

20,8

     >>

0,404

0,151

1152

1907

65,5

5. Построение калибровочного графика.
Обработку данных для построения калибровочного графика и таблицы расчета активности ЩФ удобно осуществлять с помощью электронных таблиц Excel, позволяющиъх определить наиболее оптимальный вид зависимости между экстинцией и активностью фермента.

В таблице рядов данных, вводим показатели активностей ЩФ и экстинций калибровочных проб. Через функцию ,,Мастер диаграмм“ выбираем тип точечной диаграммы, строим график и задаем тип тренда, выводим на экран уравнение тренда и критерий достоверности аппроксимации.

6. Выбор контрольного материала (КМ).
Сливную сыворотку (в качестве контрольного материала) для контроля воспроизводимости при определении активности ЩФ использовать крайне неудобно, т.к. стабильность ЩФ при –20˚C не превышает 2-х месяцев, и с увеличением срока хранения наблюдается тренд-снижения показателей. Использование лиофилизированных КМ требует определенного времени для их подготовки к использованию, т. к. после растворения лиофолизированной сыворотки (как и при размораживании сливной сыворотки) необходимо выдержать их при комнатной температуре т. к. активность ЩФ в этот период будет медленно возрастать. Этих недостатков лишены жидкие КМ, что позволяет получить более объективную картину контроля.

Учет этих моментов в практической работе позволил достичь необходимых показателей точности, а также преемлемых результатов циклах в ФСВОК по данному тесту.

Литература.

1. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Под редакцией В. В. Меньшикова. с. 47.

2. Д. Вилькинсон. Принципы и методы диагностической энзимологии. М: Медицина. 1981. с. 160-161.

3. В.С. Камышников. Клинические лабораторные тесты от А до Я. Справочное пособие. Минск: Беларуская навука. 1999. с. 338.

4. Г.А. Кочетов Практическое руководство по энзимологии. М: Высшая школа. 1980. с. 255.

Источник: http://www.medlab.scn.ru/

Статья опубликована на сайте http://www.rusmg.ru



Комментарии

Добавить новый комментарий Для того чтобы оставить комментарий необходимо авторизоваться или зарегистрироваться на портале


Блог

  • 12 июля 2014г.

    Размер груди мешает женщинам посещать фитнес клуб

    Одна из пяти женщин говорит, что ее грудь не позволяет ей заниматься активными видами отдыха и ходить в спортивный зал. Это подтвердило исследование, проведенное Университетом Портсмута.  Полученные данные имеют решающее значение, потому что показывают, что грудь является важным фактором, который удерживает женщин от занятий спортом.

Новости

  • 23 июля 2014г.

    Новое лекарство против рака яичников

    Врачи из Онкологического центра в больнице Св. Иосифа при Университете Аризоны и медицинский центр в городе Феникс сообщили, что скоро в аптеках может появится новое лекарство для лечения рака яичников, которое будет в состоянии увеличить скорость сокращения опухоли в процессе основного лечения и продлить время до момента возвращения рака. Кроме того,  ожидается, что лекарство увеличит показатель выживаемости, хотя данные не до конца проверены.

    читать далее...

  • 18 июля 2014г.

    Совершенствуй свои навыки принятия решений с играми на Ipad

    Исследователи считают, что игры-головоломки на планшетах могут помочь людям усовершенствовать свои навыки принятия решений. На самом деле, дебаты о том, помогают ли компьютерные игры головному мозгу развиваться или вредят здоровью, до сих пор имеют место быть. Тем не менее, новые исследования показывают, что некоторые типы игр действительно помогают развивать некоторые навыки.

    читать далее...

  • 18 июля 2014г.

    Парадокс ожирения: иногда избыточный вес полезен для здоровья

    Для пациентов, которые страдают ожирением и уже обзавелись определенными болезнями из-за него, оставаться в данном состоянии может быть значительно полезнее, нежели похудание. Об этом сообщают отчеты, недавно опубликованные в докладах клиники Майо.  Но как все это работает, должен понимать каждый, кто не стремиться избавиться от своего лишнего веса.

    читать далее...

Статьи

  • 24 июля 2014г.

    Изменение формы груди: три основных метода

    Если идет речь об изменении формы и объема молочных желез, но можно рассматривать три основных метода, которые применяются в настоящее время. Это — эндопротезирование, оперативная коррекция в виде различных вариантов подтяжек молочных желез, липофилинг и нитевой лифтинг. У каждого из этих методов есть преимущества и недостатки.

    читать далее...

  • 24 июля 2014г.

    венный матрас - залог здоровья

    Крепкий и полноценный сон – это залог здоровья и отличного настроения каждого из нас. Ученые установили, что спим мы, как минимум, треть своей жизни. Поэтому необходимо уделить особое внимание не только продолжительности, но и качеству сна. Самое главное – это проветривание помещения увлажнение воздуха, использование аромамасел. Казалось бы – вот и все. Но мы забыли основное правило: если наш позвоночник находится в неудобном положении долгое время, то это чревато головной болью, раздражительностью и усталостью утром. Так что самое главное – это то, на чем мы спим, а именно – матрас.

    читать далее...

  • 23 июля 2014г.

    Привычки, которые способствуют улучшению вашего тела

    Вы, наверняка, хотите иметь красивое тело как у супермодели с обложки любимого журнала. Но обладательницы таких фигур не сидят сложа руки и уж точно не употребляют в пищу всё подряд. Работа над красотой является тяжелым трудом. Конечно, в молодости этот процесс обходится в меньшее количество средств, как финансовых, так и морально-физических. С возрастом, усилий требуется больше, но они не обязательно должны быть мучительными.

    читать далее...

  • 23 июля 2014г.

    Воспаление пениса – когда лечат таблетки, а когда лечит хирург

    Многие мужчины считают воспаление пениса неловкой проблемой, хотя в действительности с ней сталкивается очень много людей, и ничего постыдного в этом заболевании нет. К врачу обращаться непременно нужно, без стеснений и замешательств. Чем легче ваше состояние, тем легче его вылечить, так что запускать болезнь никак нельзя.

    читать далее...