Регистрация

Рубрикатор

Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы

26 августа 2013г.

Маликова С.А.

Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований активности ферментов в сыворотке крови.

Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p -Npp, по конечной точке.

Использовались наборы :

1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).

2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).

3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).

Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.

На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами (1).

Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного учета проведении данного теста следующих факторов:

1. Стандартизация биологического материала - определение активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние антикоагулянтов отражено на диаграмме.

1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта: 2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.


Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.

2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 % (3).

3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной реакции, используя реагенты различных фирм.

Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива. Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s” стабильны в течении всего срока годности.

Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для работы на 1-2 дня.

4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно завышены.

Билирубинммольл

Е опыта,         ед.

Е контроля, ед.

А~f( ΔЕ)

А~f(опыта)

Завышение,  %

    17,8

0,511

0,022

2332

2442

4,7

   136,0

0,504

0,084

1972

2407

22,1

   151,6

0,602

0,100

2397

2896

20,8

     >>

0,404

0,151

1152

1907

65,5

5. Построение калибровочного графика.
Обработку данных для построения калибровочного графика и таблицы расчета активности ЩФ удобно осуществлять с помощью электронных таблиц Excel, позволяющиъх определить наиболее оптимальный вид зависимости между экстинцией и активностью фермента.

В таблице рядов данных, вводим показатели активностей ЩФ и экстинций калибровочных проб. Через функцию ,,Мастер диаграмм“ выбираем тип точечной диаграммы, строим график и задаем тип тренда, выводим на экран уравнение тренда и критерий достоверности аппроксимации.

6. Выбор контрольного материала (КМ).
Сливную сыворотку (в качестве контрольного материала) для контроля воспроизводимости при определении активности ЩФ использовать крайне неудобно, т.к. стабильность ЩФ при –20˚C не превышает 2-х месяцев, и с увеличением срока хранения наблюдается тренд-снижения показателей. Использование лиофилизированных КМ требует определенного времени для их подготовки к использованию, т. к. после растворения лиофолизированной сыворотки (как и при размораживании сливной сыворотки) необходимо выдержать их при комнатной температуре т. к. активность ЩФ в этот период будет медленно возрастать. Этих недостатков лишены жидкие КМ, что позволяет получить более объективную картину контроля.

Учет этих моментов в практической работе позволил достичь необходимых показателей точности, а также преемлемых результатов циклах в ФСВОК по данному тесту.

Литература.

1. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Под редакцией В. В. Меньшикова. с. 47.

2. Д. Вилькинсон. Принципы и методы диагностической энзимологии. М: Медицина. 1981. с. 160-161.

3. В.С. Камышников. Клинические лабораторные тесты от А до Я. Справочное пособие. Минск: Беларуская навука. 1999. с. 338.

4. Г.А. Кочетов Практическое руководство по энзимологии. М: Высшая школа. 1980. с. 255.

Источник: http://www.medlab.scn.ru/

Статья опубликована на сайте http://www.rusmg.ru



Комментарии

Добавить новый комментарий Для того чтобы оставить комментарий необходимо авторизоваться или зарегистрироваться на портале


Блог

  • 20 августа 2014г.

    Почему все звезды и половина Интернета выливает на себя ведро со льдом? Боковой амиотрофический склероз.

    В некоторых частях мира сейчас довольно жарко, но это не причина для масштабных обливаний холодной водой. Социальные медиа поглощены так называемым #icebucketchallenge тегом, который обозначает вызов облить себя ведром со льдом. Задача человека, которому был назначен данный вызов - вылить на себя ведро холодной воды, снять это на видео и разместить его в социальных медиа. В процессе, человек должен назначить кого-то еще выполнить данное задание и таким образом, акция распространяется по Интернету словно вирус. Но зачем? А все ради того, чтобы увеличить осведомленность населения планеты о болезни, которая называется боковой амиотрофический склероз. Те, кто отказывается принять вызов, должны сделать пожертвование в благотворительные фонды ALS (фонды, посвященные борьбе с болезнью) по своему выбору.

  • 12 июля 2014г.

    Размер груди мешает женщинам посещать фитнес клуб

    Одна из пяти женщин говорит, что ее грудь не позволяет ей заниматься активными видами отдыха и ходить в спортивный зал. Это подтвердило исследование, проведенное Университетом Портсмута.  Полученные данные имеют решающее значение, потому что показывают, что грудь является важным фактором, который удерживает женщин от занятий спортом.

Новости

  • 01 сентября 2014г.

    Читайте это, стоя, ибо сидеть - это новое курить

    Джеймс Ливайн, директор Государственного университета Решений Ожирения при клинике Майо в штате Аризона, США, считает, что сидеть может быть еще хуже, чем курить. В новой книге, под название "Вставайте!" он говорит о науке, которая доказывает, что размещение наших ягодиц на стульях в течение большей части дня, убивает нас. Точнее, он считает, что мы теряем два часа жизни за каждый час, проведенный на стуле.

    читать далее...

  • 31 августа 2014г.

    Дженнифер Энистон отговаривает друзей от пластических операций

    Многие люди уже привыкли к давящим тенденциям, которые приносят в нашу жизнь звезды и знаменитости. Так, "нестареющий" Голливуд заставляет всех задуматься о пластике для удержания молодости или разного вида операциях для красивых селфи-фотографий в Инстаграме.  Но Дженнифер Энистон в последнем интервью отметила свое нежелание пользоваться услугами хирургов, чтобы избежать старения или избавиться от лишних кило.

    читать далее...

  • 30 августа 2014г.

    Удаление мелких сосудов на теле стало трендом из-за социальных сетей

    Мелкие сосуды на лице и теле, которые имеют стойкое расширение, создают неприятную паутиновую сеточку, которая четко выделяется на фоне здоровой кожи. Особенно данная проблема характерная для крыльев носа и ног, но также такие вены присутствуют и на животе. На самом деле, такая сеточка вен видна в том или ином месте тела у многих женщин, но последняя тенденция к фотографированию себя в спортзалах или на пляже, породила новую тенденцию к лазерному лечению расширения сосудов в области живота, когда раньше их преимущественно удаляли лишь с лица.

    читать далее...

  • 21 августа 2014г.

    Беременным женщинам советуют избегать консервированного тунца

    Рыба полезна для беременных женщин. Более того, американское управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов советует потреблять около 12 унций рыбы в неделю (около 240 граммов). Но, несмотря на то, что рыба является хорошим источником белка и жирных кислот омега-2, некоторые виды рыбы также богаты метилртутью.

    читать далее...

Статьи

  • 01 сентября 2014г.

    Холестерин: 5 полезных сведений

    Ваше тело нуждается в некотором количестве холестерина, чтобы функционировать. Стенки клеток, известные как мембраны, требуют холестерин для производства гормонов, витамина D и желудочной кислоты, которая помогает переваривать жиры. Но телу нужно только ограниченное количество холестерина, и когда его слишком много, начинаются проблемы со здоровьем, в том числе возникают сердечнососудистые заболевания.

    читать далее...

  • 01 сентября 2014г.

    "Неудобная" и болезненная косточка на большом пальце ноги

    Довольно часто можно встретить женщину преклонных лет в разношенной мягкой обуви без каблуков, из которой выпирают косточки больших пальцев. Это заболевание по-научному называют вальгусной деформацией, а в народе его называют по-разному – шишками, косточками, наростами.

    читать далее...

  • 01 сентября 2014г.

    Что может помочь при геморрое?

    Геморрой является распространенной причиной болей и ярко-красного кровотечения из прямой кишки, но в зависимости от формы геморроя, с ситуацией часто можно справиться в домашних условиях. Знайте, однако, что эксперты рекомендуют колоноскопию всем пациентам с геморроем, которые старше 40 лет и имеют кровотечение из прямой кишки.

    читать далее...

  • 01 сентября 2014г.

    Лечение эректильной дисфункции

    Многие мужчины сталкивались или знают о таком диагнозе, как эректильная дисфункция. Под этим термином понимается неспособность мужчины достичь необходимой стойкости эрекции на время полового акта. Нарушениями могут подвергаться мужчины в возрасте после 25 лет и к 40 годам процент пациентов только увеличивается.

    читать далее...