Регистрация

Рубрикатор

Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы

26 августа 2013г.

Маликова С.А.

Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований активности ферментов в сыворотке крови.

Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p -Npp, по конечной точке.

Использовались наборы :

1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).

2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).

3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).

Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.

На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами (1).

Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного учета проведении данного теста следующих факторов:

1. Стандартизация биологического материала - определение активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние антикоагулянтов отражено на диаграмме.

1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта: 2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.


Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.

2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 % (3).

3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной реакции, используя реагенты различных фирм.

Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива. Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s” стабильны в течении всего срока годности.

Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для работы на 1-2 дня.

4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно завышены.

Билирубинммольл

Е опыта,         ед.

Е контроля, ед.

А~f( ΔЕ)

А~f(опыта)

Завышение,  %

    17,8

0,511

0,022

2332

2442

4,7

   136,0

0,504

0,084

1972

2407

22,1

   151,6

0,602

0,100

2397

2896

20,8

     >>

0,404

0,151

1152

1907

65,5

5. Построение калибровочного графика.
Обработку данных для построения калибровочного графика и таблицы расчета активности ЩФ удобно осуществлять с помощью электронных таблиц Excel, позволяющиъх определить наиболее оптимальный вид зависимости между экстинцией и активностью фермента.

В таблице рядов данных, вводим показатели активностей ЩФ и экстинций калибровочных проб. Через функцию ,,Мастер диаграмм“ выбираем тип точечной диаграммы, строим график и задаем тип тренда, выводим на экран уравнение тренда и критерий достоверности аппроксимации.

6. Выбор контрольного материала (КМ).
Сливную сыворотку (в качестве контрольного материала) для контроля воспроизводимости при определении активности ЩФ использовать крайне неудобно, т.к. стабильность ЩФ при –20˚C не превышает 2-х месяцев, и с увеличением срока хранения наблюдается тренд-снижения показателей. Использование лиофилизированных КМ требует определенного времени для их подготовки к использованию, т. к. после растворения лиофолизированной сыворотки (как и при размораживании сливной сыворотки) необходимо выдержать их при комнатной температуре т. к. активность ЩФ в этот период будет медленно возрастать. Этих недостатков лишены жидкие КМ, что позволяет получить более объективную картину контроля.

Учет этих моментов в практической работе позволил достичь необходимых показателей точности, а также преемлемых результатов циклах в ФСВОК по данному тесту.

Литература.

1. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Под редакцией В. В. Меньшикова. с. 47.

2. Д. Вилькинсон. Принципы и методы диагностической энзимологии. М: Медицина. 1981. с. 160-161.

3. В.С. Камышников. Клинические лабораторные тесты от А до Я. Справочное пособие. Минск: Беларуская навука. 1999. с. 338.

4. Г.А. Кочетов Практическое руководство по энзимологии. М: Высшая школа. 1980. с. 255.

Источник: http://www.medlab.scn.ru/

Статья опубликована на сайте http://www.rusmg.ru




Вы можете оставить заявку на бесплатный подбор врача


Комментарии

Добавить новый комментарий Для того чтобы оставить комментарий необходимо авторизоваться или зарегистрироваться на портале


Блог

  • 20 августа 2014г.

    Почему все звезды и половина Интернета выливает на себя ведро со льдом? Боковой амиотрофический склероз.

    В некоторых частях мира сейчас довольно жарко, но это не причина для масштабных обливаний холодной водой. Социальные медиа поглощены так называемым #icebucketchallenge тегом, который обозначает вызов облить себя ведром со льдом. Задача человека, которому был назначен данный вызов - вылить на себя ведро холодной воды, снять это на видео и разместить его в социальных медиа. В процессе, человек должен назначить кого-то еще выполнить данное задание и таким образом, акция распространяется по Интернету словно вирус. Но зачем? А все ради того, чтобы увеличить осведомленность населения планеты о болезни, которая называется боковой амиотрофический склероз. Те, кто отказывается принять вызов, должны сделать пожертвование в благотворительные фонды ALS (фонды, посвященные борьбе с болезнью) по своему выбору.

  • 12 июля 2014г.

    Размер груди мешает женщинам посещать фитнес клуб

    Одна из пяти женщин говорит, что ее грудь не позволяет ей заниматься активными видами отдыха и ходить в спортивный зал. Это подтвердило исследование, проведенное Университетом Портсмута.  Полученные данные имеют решающее значение, потому что показывают, что грудь является важным фактором, который удерживает женщин от занятий спортом.

Справочная информация

Новости

Статьи

  • 23 ноября 2014г.

    Домашние животные могут стать переносчиками различных заболеваний

    Уход за домашними животными является отличным опытом для детей, обучая их ответственности, мягкости и уважению к другим живым существам. Как и взрослые, дети могут извлечь огромную выгоду из такого общения со своими питомцами, но важно помнить, что домашние животные могут стать переносчиками различных заболеваний. Так что если вы думаете о покупке питомца, или он у вас уже есть, очень важно знать, как защитить свою семью от инфекций.

    читать далее...

  • 20 ноября 2014г.

    Лазерное удаление сосудистых звездочек

    Появление звездочек может быть обусловлено генетически. Если у мамы на ногах были видны синие капилляры, вполне вероятно, что рано или поздно дочь тоже сталкнется с такой проблемой. Другая причина — гормональный сбой. Он может произойти в результате приема контрацептивов, прочих гормональных препаратов или во время беременности. 

    читать далее...

  • 20 ноября 2014г.

    Быть красивой всегда!

    У  каждой женщины наступает такой момент, когда она сама себе говорит: «Так, дети подросли. Забот стало значительно меньше. Теперь в моей жизни все изменится! Буду больше отдыхать и наслаждаться жизнью». Не исключением была и я. Действительно, когда дети повзрослели и перестали требовать пристального внимания к себе, я свободно вздохнула. Ну, наконец-то, поживу и для себя: поменяю прическу, обновлю гардероб, займусь спортом…

    читать далее...

  • 20 ноября 2014г.

    Как сделать медицинскую книжку?

    Оформление санитарной книжки часто требуется при трудоустройстве. Так, медицинская книжка понадобится, если человек устраивается на работу в сферу общепита, коммунальных услуг, продажи продуктов и промтоваров либо в детское учреждение. Многих вводит в ступор и вызывает чувство паники необходимость оформления книжки. Но всё не так сложно, как кажется. читать далее...