Регистрация

Рубрикатор



Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы

26 августа 2013г.

Маликова С.А.

Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований активности ферментов в сыворотке крови.

Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p -Npp, по конечной точке.

Использовались наборы :

1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).

2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).

3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).

Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.

На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами (1).

Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного учета проведении данного теста следующих факторов:

1. Стандартизация биологического материала - определение активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние антикоагулянтов отражено на диаграмме.

1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта: 2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.


Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.

2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 % (3).

3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной реакции, используя реагенты различных фирм.

Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива. Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s” стабильны в течении всего срока годности.

Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для работы на 1-2 дня.

4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно завышены.

Билирубинммольл

Е опыта,         ед.

Е контроля, ед.

А~f( ΔЕ)

А~f(опыта)

Завышение,  %

    17,8

0,511

0,022

2332

2442

4,7

   136,0

0,504

0,084

1972

2407

22,1

   151,6

0,602

0,100

2397

2896

20,8

     >>

0,404

0,151

1152

1907

65,5

5. Построение калибровочного графика.
Обработку данных для построения калибровочного графика и таблицы расчета активности ЩФ удобно осуществлять с помощью электронных таблиц Excel, позволяющиъх определить наиболее оптимальный вид зависимости между экстинцией и активностью фермента.

В таблице рядов данных, вводим показатели активностей ЩФ и экстинций калибровочных проб. Через функцию ,,Мастер диаграмм“ выбираем тип точечной диаграммы, строим график и задаем тип тренда, выводим на экран уравнение тренда и критерий достоверности аппроксимации.

6. Выбор контрольного материала (КМ).
Сливную сыворотку (в качестве контрольного материала) для контроля воспроизводимости при определении активности ЩФ использовать крайне неудобно, т.к. стабильность ЩФ при –20˚C не превышает 2-х месяцев, и с увеличением срока хранения наблюдается тренд-снижения показателей. Использование лиофилизированных КМ требует определенного времени для их подготовки к использованию, т. к. после растворения лиофолизированной сыворотки (как и при размораживании сливной сыворотки) необходимо выдержать их при комнатной температуре т. к. активность ЩФ в этот период будет медленно возрастать. Этих недостатков лишены жидкие КМ, что позволяет получить более объективную картину контроля.

Учет этих моментов в практической работе позволил достичь необходимых показателей точности, а также преемлемых результатов циклах в ФСВОК по данному тесту.

Литература.

1. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Под редакцией В. В. Меньшикова. с. 47.

2. Д. Вилькинсон. Принципы и методы диагностической энзимологии. М: Медицина. 1981. с. 160-161.

3. В.С. Камышников. Клинические лабораторные тесты от А до Я. Справочное пособие. Минск: Беларуская навука. 1999. с. 338.

4. Г.А. Кочетов Практическое руководство по энзимологии. М: Высшая школа. 1980. с. 255.

Источник: http://www.medlab.scn.ru/

Статья опубликована на сайте http://www.rusmg.ru





Вы можете оставить заявку на бесплатный подбор врача


Комментарии

Добавить новый комментарий Для того чтобы оставить комментарий необходимо авторизоваться или зарегистрироваться на портале


Блог

 

Справочная информация

Новости

Статьи

  • 06 декабря 2017г.

    Зубная имплантация: особенности процедуры

    Чистые, белые и сильные зубы может позволить себе не каждый. Улучшить внешний вид имеющихся зубов можно разными способами, но если зуб отсутствует, то единственный способ восстановить улыбку - использовать искусственный заменитель. В каких-то случаях можно использовать зубные мосты, но идеальным вариантом при пробелах во рту являются зубные имплантаты.

    читать далее...

  • 06 декабря 2017г.

    Диагностика и лечение мочевого пузыря

    Давно прошли те времена, когда диагностика проводилась с помощью одного стетоскопа. Современные специалисты в своём распоряжении имеют электрокардиографы, томографы, маммографы, ультразвуковые системы, электроэнцефалографы, бронхоскопы, гастрофиброскопы, колонофиброскопы и другие -скопы (с греч. значит «смотрю»). У медиков появилась возможность увидеть человека изнутри. Это позволяет поставить правильный диагноз, взять пробу с повреждённого участка, удалить небольшие инородные образования.

    читать далее...

  • 03 декабря 2017г.

    Особенности профилактической обуви для ребенка

    Уникальная, довольно сложная конструкция стопы человека открыла для него способность к прямохождению. 26 костей, составляющих стопу, выполняют одновременно функцию опоры и амортизатора. Наличие в стопе хрящей и связок обеспечивает прочное, но гибкое соединение между костями, а мышцы и сухожилия позволяют выполнять различные действия.

    читать далее...

  • 03 декабря 2017г.

    Лазерная эпиляция: 5 вещей, которые нужно знать

    Несмотря на то, как давно лазерная эпиляция предлагается в салонах и клиниках России, у большинства людей все еще есть много вопросов о данной процедуре (многие россиянки действительно ничего не знают о данной системе удаления волос). На форумах вы можете встретить разные отзывы о лазерах - как что-то вроде "После того, как я подписался на курс лечения лазером в клинике N, я выбросила свои бритвы, кремы для бритья и набор для домашнего удаления волос воском", так и "Это не работает, не тратьте деньги". Спойлер: оба этих отзыва являются неправдой и вам не стоит верить этим отзывам. Если вы рассматриваете удаление волос лазером, прочитайте о пяти вещах, которые вам нужно знать, прежде чем оплатить процедуру.

    читать далее...