Регистрация

Рубрикатор

Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы

26 августа 2013г.

Маликова С.А.

Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований активности ферментов в сыворотке крови.

Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p -Npp, по конечной точке.

Использовались наборы :

1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).

2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).

3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).

Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.

На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами (1).

Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного учета проведении данного теста следующих факторов:

1. Стандартизация биологического материала - определение активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние антикоагулянтов отражено на диаграмме.

1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта: 2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.


Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.

2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 % (3).

3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной реакции, используя реагенты различных фирм.

Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива. Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s” стабильны в течении всего срока годности.

Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для работы на 1-2 дня.

4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно завышены.

Билирубинммольл

Е опыта,         ед.

Е контроля, ед.

А~f( ΔЕ)

А~f(опыта)

Завышение,  %

    17,8

0,511

0,022

2332

2442

4,7

   136,0

0,504

0,084

1972

2407

22,1

   151,6

0,602

0,100

2397

2896

20,8

     >>

0,404

0,151

1152

1907

65,5

5. Построение калибровочного графика.
Обработку данных для построения калибровочного графика и таблицы расчета активности ЩФ удобно осуществлять с помощью электронных таблиц Excel, позволяющиъх определить наиболее оптимальный вид зависимости между экстинцией и активностью фермента.

В таблице рядов данных, вводим показатели активностей ЩФ и экстинций калибровочных проб. Через функцию ,,Мастер диаграмм“ выбираем тип точечной диаграммы, строим график и задаем тип тренда, выводим на экран уравнение тренда и критерий достоверности аппроксимации.

6. Выбор контрольного материала (КМ).
Сливную сыворотку (в качестве контрольного материала) для контроля воспроизводимости при определении активности ЩФ использовать крайне неудобно, т.к. стабильность ЩФ при –20˚C не превышает 2-х месяцев, и с увеличением срока хранения наблюдается тренд-снижения показателей. Использование лиофилизированных КМ требует определенного времени для их подготовки к использованию, т. к. после растворения лиофолизированной сыворотки (как и при размораживании сливной сыворотки) необходимо выдержать их при комнатной температуре т. к. активность ЩФ в этот период будет медленно возрастать. Этих недостатков лишены жидкие КМ, что позволяет получить более объективную картину контроля.

Учет этих моментов в практической работе позволил достичь необходимых показателей точности, а также преемлемых результатов циклах в ФСВОК по данному тесту.

Литература.

1. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Под редакцией В. В. Меньшикова. с. 47.

2. Д. Вилькинсон. Принципы и методы диагностической энзимологии. М: Медицина. 1981. с. 160-161.

3. В.С. Камышников. Клинические лабораторные тесты от А до Я. Справочное пособие. Минск: Беларуская навука. 1999. с. 338.

4. Г.А. Кочетов Практическое руководство по энзимологии. М: Высшая школа. 1980. с. 255.

Источник: http://www.medlab.scn.ru/

Статья опубликована на сайте http://www.rusmg.ru



Комментарии

Добавить новый комментарий Для того чтобы оставить комментарий необходимо авторизоваться или зарегистрироваться на портале


Блог

  • 20 августа 2014г.

    Почему все звезды и половина Интернета выливает на себя ведро со льдом? Боковой амиотрофический склероз.

    В некоторых частях мира сейчас довольно жарко, но это не причина для масштабных обливаний холодной водой. Социальные медиа поглощены так называемым #icebucketchallenge тегом, который обозначает вызов облить себя ведром со льдом. Задача человека, которому был назначен данный вызов - вылить на себя ведро холодной воды, снять это на видео и разместить его в социальных медиа. В процессе, человек должен назначить кого-то еще выполнить данное задание и таким образом, акция распространяется по Интернету словно вирус. Но зачем? А все ради того, чтобы увеличить осведомленность населения планеты о болезни, которая называется боковой амиотрофический склероз. Те, кто отказывается принять вызов, должны сделать пожертвование в благотворительные фонды ALS (фонды, посвященные борьбе с болезнью) по своему выбору.

  • 12 июля 2014г.

    Размер груди мешает женщинам посещать фитнес клуб

    Одна из пяти женщин говорит, что ее грудь не позволяет ей заниматься активными видами отдыха и ходить в спортивный зал. Это подтвердило исследование, проведенное Университетом Портсмута.  Полученные данные имеют решающее значение, потому что показывают, что грудь является важным фактором, который удерживает женщин от занятий спортом.

Справочная информация

Новости

  • 19 октября 2014г.

    Доступ к мозгу через щеку

    В традиционных операциях на головном мозге, хирург сначала высверливает отверстие для доступа к серому веществу. А как быть с операциями, когда нужен доступ к нижней части головного мозга, например, для лечения тяжелых эпилептических припадков? Все верно, в этом случае высверливается более глубокое отверстие. Но так было до сих пор. Недавно инженеры из Университета Вандербильта разработали хирургического робота, которые использует альтернативную точку входа - щеку.

    читать далее...

  • 17 октября 2014г.

    Для здоровья глаз вам понадобиться больше, чем простая морковка. Как семьи могут сохранить свое зрение через пищу, которую они едят

    Что кроме морковки поможет вам сохранить здоровье глаз? Для основных питательных вещества, которые крайне важны для современного человека. Читайте, что вам нужно кушать, чтобы добавить здоровье ваши глазам...и речь не идет о морковке.

    читать далее...

  • 15 октября 2014г.

    Иммунитет к вирусу Эбола

    Исследователи из Университета Техаса говорят, что некоторые люди, зараженные вирусом Эбола, не проявляют никаких симптомов. Вместо этого, у них развивается иммунитет к данному заболеванию. Ученые указывают на два анализа тестов крови, которые были взяты во время вспышки. В первом тесте 71% людей с вирусом в крови не демонстрировали никаких симптомов, в то время как во втором тесте 46% людей, участвующие в телесном контакте с зараженными вирусом Эбола пациентами не демонстрировали никаких  симптомов также имея вирус в крови. Ученые предполагают, что эти люди развили иммунитет к болезни.

    читать далее...

  • 14 октября 2014г.

    Вакцину от вируса Эбола уже бы разработали, если бы был выделен бюджет

    Эбола уже убила 4024 человека из инфицированных 8376 в Западной Африке. И она вселяет страх не только в тех, кто живет в этом регионе, но и во все население по всему миру. "Вспышка случилась слишком быстро", - говорит директор Центра по контролю и профилактике заболеваний США Том Фриден. Он отмечает, что лихорадка Эбола была обнаружена еще в 1976 году и сразу же определена как опасный вирус, но никто за столько лет так и не разработал вакцину.

    читать далее...

Статьи

  • 20 октября 2014г.

    Осень - это тоже пора аллергий

    Лето ушло, и опавшая листва покрыла ваш газон. Так почему же вы до сих пор кашляете и чихаете? Добро пожаловать осенний сезон аллергий - сезон, который по-прежнему имеет цветущую растительность и другие факторы, которые влияют на аллергии, в том числе плесень и пылевых клещей.

    читать далее...

  • 20 октября 2014г.

    Остеопат, мануальный терапевт, физиотерапевт

    Для большинства людей остеопатия, мануальная терапия и физиотерапия являются большой загадкой. В основном, это происходит потому, что все эти терапии приравниваются к слову массаж, а ведь это не правильно на корню. У этих практик есть общие черты. Например, все они направлены на облегчение или лечение скелетно-мышечных болей; для каждой из них нужно пройти обучение и получить сертификат.  Все эти практики пытаются уменьшить боли человека, но с разной философией и технологией подхода.

    читать далее...

  • 20 октября 2014г.

    Как избежать возникновения язвы желудка?

    Язва – это очень тяжелый и болезненный недуг, который опасен возможными осложнениями. Нужно как можно раньше прийти на прием к высококвалифицированному специалисту, чтобы начать правильное лечение. Врач обязательно назначит диету, пропишет лекарства, к примеру, Мизопростол, информацию о котором можно узнать по ссылке.

    читать далее...

  • 17 октября 2014г.

    Как нервные расстройства влияют на здоровье ЖКТ?

    Человеческий организм – это единая система. В нем все связанно. Поэтому, если страдает один орган или система, это неизбежно приводит к тому, что начинает страдать и все тело в целом. В особенности же от нервного перенапряжения или расстройства нервной системы страдает ЖКТ.

    читать далее...