Регистрация

Рубрикатор

Пути повышения качества определения общей щелочной фосфатазы

26 августа 2013г.

Маликова С.А.

Несмотря на то, что обнаружение фосфатазной активности является одним из давно используемых энзиматических лабораторных тестов, он не теряет своей значимости и в настоящее время, особенно при заболеваниях гепатобилиарной системы. Данный тест является постоянно востребованным, так ежегодно в лаборатории городской клинической больницы № 20 г. Красноярска проводится в среднем около 4000 исследований в год по определению активности общей щелочной фосфатазы (ЩФ), что составляет около 12 % общего от количества всех исследований активности ферментов в сыворотке крови.

Определение активности фермента проводится методом, основанным на гидролизе p -Npp, по конечной точке.

Использовались наборы :

1. ,,Диахим-ЩФ“ НПФ ,,Абрис +“.(АМП буфер с сульфатом магния).

2. ,,Новофосфал“ ЗАО ,,Вектор-Бест“ (ДЭА буфер с магнием хлористым).

3. Фирмы ,,Vital D-s” (с глицериновым буфером).

Внутри лабораторный контроль качества по данному методу осуществлялся с использованием контрольных материалов фирмы Медлакор: ,,ЖСВ-контроль“, ,,ЖСП-контроль“.

На начальном этапе внедрения методологии контроля качества, определенном в приказе № 45 МЗ РФ от 07.02. 2000 г статистическая обработка данных показали не соответствие полученных результатов (CV 20 % , В 20) с рекомендуемыми нормами (1).

Работа с литературой и анализ практических результатов с целью повысить качество определения активности фермента, позволили выделить ряд проблем, связанных с определением активности ЩФ. В результате мы пришли к необходимости обязательного учета проведении данного теста следующих факторов:

1. Стандартизация биологического материала - определение активности ЩФ следует проводить только в сыворотке крови. Использование антикоагулянтов ведет к снижению ферментативной активности. Ингибирующее влияние антикоагулянтов отражено на диаграмме.

1-активность ЩФ сыворотки.
Активность ЩФ плазмы, полученной с использованием в качестве антикоагулянта: 2-гепарина, 3-оксалата, 4-цитрата, 5-ЭДТА.


Наибольший ингибирующий эффект наблюдается при использовании ЭДТА (связан с образованием комплексов ЭДТА с ионами Mg**)(2). Наиболее приемлемым антикоагулянтом для определения активности ЩФ в плазме является гепарин.

2. Стандартизация сроков хранения. По данному вопросу в литературных источниках существуют разные мнения. Если нет возможности провести анализ в день получения сыворотки или необходимо повторное исследование пробы на следующий день, мы придерживаемся следующих условий: сыворотку лучше хранить при комнатной температуре в пластиковой пробирке с пробкой. При замораживании активность может снижаться, а при хранении в холодильнике – повышаться до 10 % (3).

3. Особенности приготовления рабочего раствора для ферментативной реакции, используя реагенты различных фирм.

Наборы фирмы ,,Vital D-s”: буфер и p-Npp полностью готовы к проведению анализа; не требуют дополнительного растворения и разведения дистиллированной водой, возможно приготовления любого минимального количества рабочего реактива. Показатели контрольной сыворотки с использованием рабочего реактива ,,Vital D-s” стабильны в течении всего срока годности.

Для приготовления рабочего реактива по наборам ,,Новофосфал-ЩФ“ необходимо использовать дист. воду, свободную от карбонатов. И хотя рабочий раствор годен по методике в течение недели, лучше его готовить в количестве необходимом для работы на 1-2 дня.

4. Необходимость постановки контроля для каждой пробы особенно для сывороток с высоким содержанием билирубина, иначе результаты будут ложно завышены.

Билирубинммольл

Е опыта,         ед.

Е контроля, ед.

А~f( ΔЕ)

А~f(опыта)

Завышение,  %

    17,8

0,511

0,022

2332

2442

4,7

   136,0

0,504

0,084

1972

2407

22,1

   151,6

0,602

0,100

2397

2896

20,8

     >>

0,404

0,151

1152

1907

65,5

5. Построение калибровочного графика.
Обработку данных для построения калибровочного графика и таблицы расчета активности ЩФ удобно осуществлять с помощью электронных таблиц Excel, позволяющиъх определить наиболее оптимальный вид зависимости между экстинцией и активностью фермента.

В таблице рядов данных, вводим показатели активностей ЩФ и экстинций калибровочных проб. Через функцию ,,Мастер диаграмм“ выбираем тип точечной диаграммы, строим график и задаем тип тренда, выводим на экран уравнение тренда и критерий достоверности аппроксимации.

6. Выбор контрольного материала (КМ).
Сливную сыворотку (в качестве контрольного материала) для контроля воспроизводимости при определении активности ЩФ использовать крайне неудобно, т.к. стабильность ЩФ при –20˚C не превышает 2-х месяцев, и с увеличением срока хранения наблюдается тренд-снижения показателей. Использование лиофилизированных КМ требует определенного времени для их подготовки к использованию, т. к. после растворения лиофолизированной сыворотки (как и при размораживании сливной сыворотки) необходимо выдержать их при комнатной температуре т. к. активность ЩФ в этот период будет медленно возрастать. Этих недостатков лишены жидкие КМ, что позволяет получить более объективную картину контроля.

Учет этих моментов в практической работе позволил достичь необходимых показателей точности, а также преемлемых результатов циклах в ФСВОК по данному тесту.

Литература.

1. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Под редакцией В. В. Меньшикова. с. 47.

2. Д. Вилькинсон. Принципы и методы диагностической энзимологии. М: Медицина. 1981. с. 160-161.

3. В.С. Камышников. Клинические лабораторные тесты от А до Я. Справочное пособие. Минск: Беларуская навука. 1999. с. 338.

4. Г.А. Кочетов Практическое руководство по энзимологии. М: Высшая школа. 1980. с. 255.

Источник: http://www.medlab.scn.ru/

Статья опубликована на сайте http://www.rusmg.ru



Комментарии

Добавить новый комментарий Для того чтобы оставить комментарий необходимо авторизоваться или зарегистрироваться на портале


Блог

  • 20 августа 2014г.

    Почему все звезды и половина Интернета выливает на себя ведро со льдом? Боковой амиотрофический склероз.

    В некоторых частях мира сейчас довольно жарко, но это не причина для масштабных обливаний холодной водой. Социальные медиа поглощены так называемым #icebucketchallenge тегом, который обозначает вызов облить себя ведром со льдом. Задача человека, которому был назначен данный вызов - вылить на себя ведро холодной воды, снять это на видео и разместить его в социальных медиа. В процессе, человек должен назначить кого-то еще выполнить данное задание и таким образом, акция распространяется по Интернету словно вирус. Но зачем? А все ради того, чтобы увеличить осведомленность населения планеты о болезни, которая называется боковой амиотрофический склероз. Те, кто отказывается принять вызов, должны сделать пожертвование в благотворительные фонды ALS (фонды, посвященные борьбе с болезнью) по своему выбору.

  • 12 июля 2014г.

    Размер груди мешает женщинам посещать фитнес клуб

    Одна из пяти женщин говорит, что ее грудь не позволяет ей заниматься активными видами отдыха и ходить в спортивный зал. Это подтвердило исследование, проведенное Университетом Портсмута.  Полученные данные имеют решающее значение, потому что показывают, что грудь является важным фактором, который удерживает женщин от занятий спортом.

Справочная информация

Новости

  • 17 сентября 2014г.

    Реклама в медицинской отрасли. Повышение эффективности продвижения медицинских товаров и услуг

    24 сентября 2014г. КА SmartMedia совместно с партнерами проводит практический форум-тренинг «Реклама в медицинской отрасли. Повышение эффективности продвижения медицинских товаров и услуг». Мероприятие направлено на директоров по маркетингу, маркетологов и менеджеров по рекламе.

    читать далее...

  • 12 сентября 2014г.

    Простой метод превращает клетки кожи в укрепляющие иммунитет лейкоциты

    Впервые, ученым удалось превратить клетки кожи человека в трансплантабельные лейкоциты (белые кровяные клетки). Главная деятельность лейкоцитов - это защита организма от внутренних и внешних патогенов. Это солдаты иммунной системы,  которые борются с инфекциями и другими ненужными оккупантами, желающими вторгнуться в организм. Работа, проделанная Институтом Солка, может позволить ученым создавать новые лейкоциты, способные атаковать больные или раковые клетки, а также увеличивать иммунный ответ организма на другие заболевания.

    читать далее...

  • 11 сентября 2014г.

    Устройство для подсчета калорий в вашей тарелке

    Счетчики калорий позволяют вам следить за потребляемым количеством продуктов, но вот беда: вам самим приходится высчитывать нужные порции. И исследователи всего мира давно пытаются разработать инструмент, который будет считать калории за вас. Команда GE Global Research подошла к решению этой задачи ближе всего.

    читать далее...

  • 04 сентября 2014г.

    Лекарства от депрессии ведут к потере зубных имплантатов

    Селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (СИОЗС), наиболее широко используемые в препаратах для  лечения депрессии, были выделены как причина уменьшения образования костной ткани и увеличения риска перелома костей. На остеоинтеграцию (это одна из форм интеграции в костную ткань) влияет костный метаболизм, поэтому новое исследование изучило связь СИОЗС и риска сбоев истеоинтегрированных имплантатов.

    читать далее...

Статьи

  • 17 сентября 2014г.

    Дезинфицирующие средства - необходимый элемент современности

    Нас окружают миллиарды микроорганизмов, вирусов и бактерий. К сожалению, ряд из них являются болезнетворными или патогенными. Человек располагает иммунитетом, который борется с бактериями и микробами, но иногда ему нужны помощники. Такими друзьями человека являются дезинфицирующие средства применяемые с целью нейтрализации основной причины (возбудителей) инфекционных заболеваний.

    читать далее...

  • 16 сентября 2014г.

    Выбираем пансионат для пожилых людей

    Возрастные заболевания существенно осложняют жизнь пожилого человека и его близких. Уход за больным или инвалидом требует круглосуточного присутствия и использования медицинских навыков. У современного человека нет возможности бросить работу и предоставлять необходимую заботу в домашних условиях. Для получения пожилым человеком должного и квалифицированного ухода стоит поместить его в специализированное учреждение: дом инвалидов или пансионат для пожилых людей.

    читать далее...

  • 15 сентября 2014г.

    Как здоровая пища вредит зубам

    Здоровая пища и качественные продукты питания могут оказывать хороший эффект но общее состояние организма, но кое-какая полезная для тела еда, вредна для зубов. Так, сырые и не приготовленные продукты могут стать причиной сколов и других повреждений, что ведет к проблемам с деснами и последующей необходимости в услугах стоматолога.

    читать далее...

  • 15 сентября 2014г.

    Несколько советов по выбору медицинского центра

    Одним из основных достижений современной цивилизации является общедоступность медицинской помощи населению. В любом крупном населённом пункте должны быть медицинские учреждения, и чем больше людей живёт в этом регионе, тем больше таких заведений. Пациенты вправе выбирать, обращаться им в свою поликлинику или в диагностический центр. Часто возникает затруднение, когда подобных учреждений много, и не сразу можно решить, в какое лучше обратиться.

    читать далее...